感染动物体内的猪蓝耳病毒通过鼻分泌物、唾液、尿液、粪便、血液、乳汁和精液排出,且排毒期的持续时间因分泌物类型、动物年龄、免疫状态以及猪蓝耳病的具体毒株而异。该病毒可在淋巴组织中长期存在(有报道称在感染后长达 251 天仍可在扁桃体中检测到),即使在病毒血症消除数月后仍可存在。
在猪蓝耳病防控方案中,至关重要的是选择能够在病毒排出最后阶段检测出携带动物的样本类型和采样技术,其中淋巴组织和唾液是首选样本。

口腔液采样技术的发展在提高检测能力方面取得了重大进展,特别是在低流行率情况和感染后期。然而,这类样本中存在的抑制剂要求在进行RT - qPCR之前对样本进行优化保存。此外,CT 值通常较高,这也限制了对病毒进行测序。
几年前提出的扁桃体刮取法存在一个显著局限:它需要刮擦扁桃体以获取扁桃体渗出物,这一操作需使用勺子等工具,因此在活体动物身上实际操作起来很困难。2024 年,来自爱荷华大学的李鹏发表了一种改进方法,将刮取法改进为一种侵入性较小的技术,即扁桃体擦拭法。该方法与感染母猪的血清相比,检测病毒方面表现更好。

标注采样区域的解剖图。
随后,按照李鹏(2024 年)所描述的方案并进行了一些修改,在西班牙阿拉贡和加泰罗尼亚地区的多个农场对该方法进行了评估。与李鹏所描述的一样,也使用了带有海绵头的授精导管,但增加了以下改动:
- 输精管尖端未附着纱布。
- 采样时对动物进行了保定,以便直接采集扁桃体样本,因为在活动的动物身上进行采样会很困难。
- 样本被收集到 Falcon 管中以便进行处理。
该研究在两种类型的农场中开展:
- 育肥场,其仔猪在保育阶段已自然感染。
- 后备母猪培育场,其后备母猪在保育阶段曾自然感染过,目的是检测出慢性携带者,并防止在将它们转移到商品母猪场时引入病毒。
在第一类农场中,将猪圈视为流行病学单元。除了大栏口腔液采样外,从每个猪圈中挑选 5 头猪,并对这 5 头猪进行采血和扁桃体擦拭采样。
该研究的目的是评估在群体层面上,通过血液混合样本、扁桃体擦拭样本和口腔液样本进行病毒检测的能力(检测结果为阴性或阳性)评估。
在第二类农场中,采集了每头动物的血清、气管支气管刮取物和扁桃体擦拭物样本,并针对每头动物对分析结果进行了比较。

扁桃体擦拭物样本的采集。

气管支气管刮取物样本的采集。
所有样本均采用RT - qPCR进行检测分析,cT值小于 40 被视为阳性。同时还比较了各类样本的阳性程度(病毒载量)。
结果显示,与 140 日龄时采集的口咽部扁桃体刮取物样本,以及血清和口腔液样本的检测结果(阳性率 66.6%)相比,扁桃体擦拭物样本检测出的猪蓝耳(PRRS)病毒阳性群体比例更高(达 100%)。此外,与血清样本(平均cT值为 35.6)和口腔液样本(平均 cT 值为 35.5)相比,阳性扁桃体擦拭物样本的平均 cT 值更低(为 30.7)。
蓝耳病毒检出率
| 样本类型 | 10周 | 20周 |
|---|---|---|
| 血液 | 100% | 65.51% |
| 口腔液 | 100% | 65.51% |
| 扁桃体擦拭物 | 100% |
Average cT value of PRRSV
| 样本类型 | 10周 | 20周 |
|---|---|---|
| 血清 | 23.16 | 35.67 |
| 口腔液 | 27.00 | 37.00 |
| 扁桃体擦拭物 | 30.67 |

不同样本类型的猪蓝耳病毒平均cT值
在针对慢性感染个体动物开展的研究中,与血清样本(阳性检出率 7.7%)和气管支气管刮取物样本(阳性检出率 30.8%)相比,扁桃体擦拭物样本的病毒检出率更高(达到 61.5%)。阳性扁桃体擦拭物样本和气管支气管灌洗液样本的平均病毒载量cT分别为 34.1 和 33.0,高于少数呈阳性的血清样本(cT 值为 36.0)。
| 样本 | 阴性 | 阳性 | 平均 cT |
|---|---|---|---|
|
气管支气管刮取物 |
50 (33.56%) | 4 (30.77%) | 33.50 |
| 扁桃体擦拭物 | 46 (30.87%) | 8 (61.54%) | 34.13 |
| 血清 | 53 (35.57%) | 1 (7.69%) | 36.00 |

扁桃体擦拭物样本相较于血清样本和气管支气管刮取物样本的病毒检出能力。
鉴于在受强毒株感染的母猪身上可观察到长期排毒,尤其是在临产前,且这种情况可能在病毒传播给仔猪的过程中发挥作用,这种新的采样技术或许能为更好地了解受感染母猪的感染动态提供一种有用的工具。
在不久的将来,可以评估该技术在其他场景中的实用性,例如评估初产母猪的适应性、在净化计划中清除带毒猪,以及评估其对其他病原体(如猪肺炎支原体或猪流感病毒)的检测和监测能力。

